DỤNG CỤ ĐỂ ĐẦU TƯ TƯƠNG TÁC THUỐC PROTEIN-PROTEIN

Kính hiển vi huỳnh quang (thường là kính hiển vi đồng tụ) có thể được sử dụng để hình dung vị trí của các tương tác protein-protein ở cấp độ mô và tế bào. Một số kính hiển vi là các thiết bị rất tinh vi có thể được mở rộng bằng cách sử dụng các tiện ích bổ sung phần cứng để có thể thực hiện nhiều kỹ thuật hữu ích trong nghiên cứu PPI, chẳng hạn như Chụp ảnh suốt đời bằng huỳnh quang (FLIM). Tuy nhiên, chúng có một số hạn chế: chúng cung cấp thông lượng thấp, bởi vì các mẫu phải được kiểm tra từng cái một và chúng không phù hợp với các phương pháp dựa trên phát quang. Những nhược điểm khác bao gồm phản ứng quang hóa và nhiễm độc quang gây ra bởi sự tiếp xúc lâu của các mẫu với ánh sáng trong quá trình quan sát (hiện tượng thường không có trong đầu đọc vi bản vì thời gian đo ngắn được sử dụng, thường là khoảng 0,1 giây). Kính hiển vi huỳnh quang thường được sử dụng để thực hiện FRET, FLIM FRET và BiFC. Một cuộc thảo luận chi tiết về kính hiển vi huỳnh quang nằm ngoài phạm vi của bài viết này.

Hệ thống hình ảnh Invio, như kính hiển vi huỳnh quang, cũng dựa vào hình ảnh để bản địa hóa và trực quan hóa các tương tác protein-protein, nhưng công nghệ này sử dụng các mẫu vĩ mô (chuột, chuột, cây giống, lá, cây trong chậu …). Do đó, các hệ thống hình ảnh in vivo là công cụ được lựa chọn để định vị PPI trong cơ thể sinh vật hoặc áp dụng các kỹ thuật không có sẵn với kính hiển vi, như phương pháp dựa trên phát quang. Tuy nhiên, độ nhạy huỳnh quang của hệ thống hình ảnh in vivo thấp hơn đáng kể so với kính hiển vi huỳnh quang, có thể gây khó khăn cho việc phát hiện FRET, ví dụ, trừ khi phát xạ ánh sáng mạnh và xảy ra trên bề mặt mẫu (lá, da ,. ..). Đây là kết quả của việc ít ánh sáng chiếu vào mẫu trên một đơn vị bề mặt vì các mẫu lớn được sử dụng. Độ dày của mẫu cũng dẫn đến sự hấp thụ ánh sáng và tán xạ cao hơn nhiều, cả ánh sáng kích thích và phát xạ. Thông lượng của hệ thống hình ảnh in vivo cao hơn so với kính hiển vi vì vùng hình ảnh lớn cho phép một số động vật hoặc thực vật được chụp ảnh đồng thời.

Các hệ thống hình ảnh in vivo là một giải pháp phổ biến để thực hiện các xét nghiệm bổ sung split-luciferase để phát hiện các tương tác protein-protein trong planta. Điều này có thể đạt được chỉ đơn giản bằng cách chuyển đổi các lá của cây quan tâm, và cùng một lá có thể được chuyển đổi với các kết hợp khác nhau của hệ thống phóng viên với các protein quan tâm. NightShade LB 985 là một hệ thống phổ biến cho ứng dụng này. Kết quả tốt cho các thử nghiệm bổ sung split-luciferase đã được công bố, ví dụ, trong Lin et al. 2019, Liu et al. 2017,Dong et al. 2018, và Yang et al. 2019.

Ngoài các thử nghiệm bổ sung split-luciferase, BRET và BiFC đã được thực hiện thành công bằng cách sử dụng các hệ thống hình ảnh in vivo. FRET cũng đã được báo cáo nhưng, theo hiểu biết của chúng tôi, không phải cho nghiên cứu về tương tác protein-protein.