CÁC ĐỊNH DẠNG ELISA

BỐN LOẠI ELISA PHỔ BIẾN

Ngày nay, Xét nghiệm hấp thụ liên kết với Enzyme (ELISA) là một phương pháp được thiết lập tốt. Theo thời gian, các sửa đổi của quy trình ELISA tiêu chuẩn đã được phát triển. Nhìn chung, ELISA hiện được nhóm thành bốn loại chính sau: ELISA trực tiếp, gián tiếp, sandwich và cạnh tranh.

 

 ELISA TRỰC TIẾP

ELISA TRỰC TIẾP

 Đây là dạng đơn giản nhất của phương pháp ELISA. Trong đó, kháng nguyên cần phát hiện sẽ được gắn trực tiếp lên bề mặt giá thể và sẽ được phát hiện bằng một kháng thể duy nhất (kháng thể này đã được gắn enzyme).

 

ƯU VÀ NHƯỢC ĐIỂM CỦA ELISA TRỰC TIẾP

Advantages of direct ELISA

  • Đơn giản và nhanh chóng –chỉ cần một kháng thể duy nhất và quy trình làm việc chỉ bao gồm một vài bước.
  • Ít bị lỗi – số bước tương đối nhỏ so với các phương pháp ELISA khác và do yêu cầu kháng thể đơn lẻ không có nguy cơ phản ứng chéo kháng thể

 

NHƯỢC ĐIỂM CỦA ELISA TRỰC TIẾP

  • Độ đặc hiệu bị giới hạn – vì thường thì kháng nguyên có ít nhất là 2 epitope (trình diện kháng nguyên) mà phương pháp này chỉ sử dụng 1 kháng thể gắn vào một epitope.
  • Phát triển xét nghiệm tốn thời gian–Phải đánh dấu cho từng kháng thể chuyên biệt với từng đối tượng.
  • Nguy cơ phản ứng kháng thể hạn chế – gắn enzyme vào kháng thể có thể hạn chế sự sẵn có của các vị trí trên kháng thể nên liên kết với kháng nguyên

ELISA GIÁN TIẾP

ELISA gián tiếp – phương pháp ELISA phổ biến nhất – sử dụng quy trình phát hiện 2 bước. Đầu tiên, một kháng thể chính không ghi nhãn liên kết đặc biệt với kháng nguyên. Thứ hai, một kháng thể thứ cấp liên hợp enzyme liên kết đặc biệt với kháng thể chính. Phương pháp này thường được sử dụng để xác định tổng nồng độ kháng thể trong các mẫu.

ƯU NHƯỢC ĐIỂM CỦA ELISA GIÁN TIẾP 

ƯU ĐIỂM

  • Tính linh hoạt – Kháng thể thứ cấp có thể được sử dụng miễn là nó phù hợp với các loài vật chủ của kháng thể chính và nhiều loại kháng thể thứ cấp được dán nhãn có sẵn trên thị trường
  • Độ nhạy – hiều hơn một kháng thể được dán nhãn có thể liên kết với kháng thể chính bởi vì mỗi kháng thể chính chứa một số epitopes 
  • Tiết kiệm – Kháng thể gắn enzyme có thể sử dụng để đánh dấu cho nhiều loại kháng nguyên nên tiện lợi và kinh tế hơn, dễ dàng thương mại hóa.

Nhược điểm 

  • Quy trình công việc phức tạp hơn: Độ đặc hiệu của từng kháng huyết thanh là khác nhau. Điều này dẫn đến kết quả khác nhau giữa các thí nghiệm và do đó cần phải thử nghiệm với nhiều kháng huyết thanh khác nhau để kết quả có thể tin tưởng được.

 

SANDWICH ELISA

Trong Sandwich ELISA, một loại kháng thể bắt giữ được sử dụng để phủ lên các giếng sau đó liên kết kháng nguyên từ mẫu. Sau đó, kháng nguyên được phát hiện trong cấu hình ELISA trực tiếp hoặc gián tiếp. Phương pháp này thường được sử dụng để phân tích các mẫu phức tạp.

Ưu nhược điểm sandwich ELISA

Ưu điểm của sandwich ELISA

  • Tính linh hoạt và độ nhạy – cả hai, phương pháp phát hiện trực tiếp và gián tiếp có thể được sử dụng
  • Độ đặc hiệu cao– hai kháng thể được sử dụng để phát hiện kháng nguyên
  • Thích hợp cho các mẫu phức tạp – Không cần tinh chế kháng nguyên trước khi đo.

Nhược điểm của sandwich ELISA

  • Quy trình làm việc phức tạp – yêu cầu nhiều bước ủ hơn so với các định dạng ELISA khác.
  • Yêu cầu tối ưu hóa nhiều hơn–phản ứng chéo giữa các kháng thể khác nhau được sử dụng phải được kiểm tra.

ELISA cạnh tranh

Mỗi loại xét nghiệm trên có thể được điều chỉnh cho ELISA cạnh tranh, còn được gọi là ELISA ức chế. Khái niệm cơ bản của phương pháp này là kháng nguyên mẫu cạnh tranh với kháng nguyên ức chế, liên kết với một lượng kháng thể được dán nhãn hạn chế. Kháng nguyên chất ức chế được phủ trước trên một tấm vi mạch. Sau đó, mẫu được ủ trước với kháng thể có nhãn được thêm vào giếng. Tín hiệu được phát hiện sẽ yếu hơn khi có nhiều kháng nguyên trong mẫu vì càng ít kháng thể có khả năng liên kết với kháng nguyên trong giếng. Phương pháp này thường được sử dụng để phân tích các kháng nguyên nhỏ chỉ có một epitope duy nhất.

ƯU NHƯỢC ĐIỂM CỦA ELISA CẠNH TRANH

Ưu điểm của ELISA canh tranh

  • Độ nhạy cao – có thể dựa trên định dạng ELISA trực tiếp, gián tiếp hoặc sandwich
  • Độ đặc hiệu cao nhất – kháng nguyên được bắt giữ và phát hiện cụ thể
  • Mạnh mẽ –giảm thiểu ảnh hưởng của pha loãng mẫu và hiệu ứng ma trận mẫu

Nhược điểm của cạnh tranh ELISA

  • Tốn thời gian – giao thức rất phức tạp
  • Nhược điểm của định dạng phát hiện được chọn áp dụng

 

 

Tìm kiếm nhanh dịch vụ Berthold tại Việt Nam

Office: 11/84 Ngoc Khanh Street, Ba Dinh District, Hanoi VIETNAM

Mr. Mark Pham

Phone: +84 903 114 883

Email: bio@berthold.vn

Liên hệ với chúng tôi ngay hôm nay để tìm hiểu về những sản phẩm đo lường chính xác trong Sinh học Phân Tử và Y Sinh.

 

Liên hệ