Giống như bất kỳ xét nghiệm sinh học nào khác, ELISA có thể bị ảnh hưởng bởi một số yếu tố, một số yếu tố có thể gây ra vấn đề nếu không được theo dõi cẩn thận. Bảng dưới đây sẽ thảo luận về các vấn đề phổ biến nhất và cung cấp cho bạn các giải pháp có thể để giải quyết vấn đề.
Bạn có vấn đề với thí nghiệm ELISA của bạn? Bảng sau đây mô tả một số vấn đề phổ biến nhất có thể xảy ra khi thực hiện ELISA và các giải pháp có thể.
| Problem | Possible Causes | Solution |
|---|---|---|
| Weak or no signal | Incorrect reagent storage | Double check if you have followed the recommendations of your kit manufacturer. |
|
Antibody stored at 4°C for several weeks or subjected to repeated freeze/thaw cycles |
Use fresh aliquot of antibody. | |
| Expired reagents | Do not use reagents that are past the expiration date. | |
| Incorrect dilutions prepared | Check if your calculations are correctly. Use a higher concentration of detection reagent. | |
| Incorrect assay setup | Repeat assay and ensure reagents have been prepared according to the protocol and are added in the correct order. | |
| Incorrect plate reader settings | Make sure your ELISA reader settings reflect the recommended wavelength/filters. | |
| Not enough antibody used | Increase the concentration of your primary and/or secondary antibody | |
| Wells damaged with pipette or washing tips. | Be careful when dispensing and aspirating into and out of wells when pipetting manually. Recalibrate your automated plate washers so that the tips do not touch the bottom of the wells if required. | |
| High background signal | Incorrect incubation temperature | Follow your kit manufacturers recommendation or optimise the incubation temperature |
| Incorrect incubation times | Follow your kit manufacturers recommendation or optimise the incubation time | |
| Insufficient washing | If pipetting manually invert plate on absorbent tissue and allow to completely drain, to remove any residual fluid. Increasing the number of washing cycles may be useful, too. | |
| Substrate exposed to light | Perform substrate incubation in the dark | |
| Reactions not stopped | Ensure you use stop soltion as recommended in your protocol to avoid overdevelopment. | |
| Inconsistent replicates | Insufficient washing | If pipetting manually invert plate on absorbent tissue and allow to completely drain, to remove any residual fluid. Increasing the number of washing cycles may be useful, too. |
| No plate-binding of capture antibody | Prepare both, coating and blocking steps as recommended in the protocol. Make sure you´re using an ELISA plate. | |
| Incorrect plate sealing | Don´t reuse sealer to avoid well-to-well contamination. Use plate sealer during incubation. |
Office: 11/84 Ngoc Khanh Street, Ba Dinh District, Hanoi VIETNAM
Mr. Mark Pham
Phone: +84 903 114 883
Email: bio@berthold.vn
Liên hệ với chúng tôi ngay hôm nay để tìm hiểu về những sản phẩm đo lường chính xác trong Sinh học Phân Tử và Y Sinh.
Liên hệ
